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流式熒光技術又稱懸浮陣列或液相芯片,是近年來新興起的多指標聯(lián)合檢測技術,其不僅擁有化學發(fā)光高靈敏度、高精密度的優(yōu)勢,同時具備高通量、高速度、多重指標聯(lián)檢等優(yōu)勢,克服了化學發(fā)光一次只能檢測一項指標的不足,能夠滿足日益增長的臨床檢測需求,有望與化學發(fā)光形成互補,甚至替代化學發(fā)光。流式熒光技術已被逐漸地應用到臨床檢驗、遺傳分析、藥物開發(fā)、生物醫(yī)學、藥物基因,以及生物戰(zhàn)的細菌檢測等。但是目前國內(nèi)的高通量流式熒光檢測微球以進口為主,自主研發(fā)尚處于早期階段。
目前流式熒光術在國內(nèi)主要用于細胞因子的檢測。細胞因子檢測是判斷機體免疫功能的一個重要指標,因而具有重要的研究價值,同時在臨床上有諸多實用價值,對于許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療檢測都有重要的意義。在判斷機體免疫功能時,通常我們需要知道機體多個細胞因子的水平。而流式熒光技術的發(fā)明就像為檢測多個細胞因子指標量身定做的一樣,完滿迎合了這種需要同時了解多個指標的信息的需求。因此,目前國內(nèi)基于流式熒光術的細胞因子檢測迅速成為體外診斷的熱點之一,近兩年相關產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)。然而,受制于熒光編碼微球的制備技術,國內(nèi)市場上的細胞因子試劑產(chǎn)品絕大一部分都是國內(nèi)廠商通過進口原料分裝進行生產(chǎn)的。而國際上能夠提供細胞因子檢測試劑的主要生產(chǎn)商分別是美國的BD、Biolegend、AimPlex。這些廠家提供的試劑,微球不具有磁性,不利于發(fā)展相關的自動化儀器。此外,這些商家的微球采用單熒光標記,同時檢測的指標數(shù)量有限,即使采用兩種不同粒徑的微球搭配,也只能同時檢測10多種細胞因子。
此外,盡管流式熒光術能同時檢測多種細胞因子,但由于正常人的血清中細胞因子濃度較低,在實際檢測中,目前大部分試劑對正常人血清中各細胞因子的檢出率不高,一些血清樣本的熒光值甚至低于對照品濃度為0時的熒光值,結果的準確性不高。究其原因,主要是熒光編碼微球?qū)晒鈾z測抗體的非特異吸附較強,導致噪音較高(噪音為對照品為0時的檢測熒光值-微球本底檢測熒光值)。當檢測低值血清樣本中,血清中存在復雜的蛋白質(zhì)體系,不可避免這些蛋白質(zhì)同樣會與微球產(chǎn)生非特異性吸附,從而與熒光檢測抗體競爭非特異性吸附位點,使最終的熒光檢測值下降。因此減少熒光編碼微球?qū)晒鈾z測抗體的非特異性吸附可顯著提升低值血清樣本檢測的準確性。
碧芯生物科技(海南?。┯邢薰就ㄟ^不斷摸索和優(yōu)化實驗條件,通過合成特殊的粒徑不同的微球,再用Avidin修飾微球表面,最終構建了約60種低吸附的熒光編碼微球。與普通的熒光編碼微球相比,這些被特殊的微球具有對蛋白質(zhì)低非特異性吸附的特點。因此,用這種包裹好的熒光編碼微球構建的抗原檢測試劑的噪音值明顯降低,可顯著提升靈敏度及低值血清樣本的檢出率
指標名稱 | 碧芯生物Beadstar-mPlex 檢出率 | 某進口品牌細胞因子檢出率 |
IL-2 | 20/20 (100%) | 15/20 (75%) |
IL-4 | 12/20 (60%) | 4/20 (20%) |
IL-6 | 18/20 (90%) | 10/20 (50%) |
IL-10 | 20/20 (100%) | 4/20 (20%) |
IL-17A | 11/20 (55%) | 9/20 (45%) |
TNF-α | 18/20 (90%) | 4/20 (20%) |
IFN-γ | 17/20 (85%) | 3/20 (15%) |