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液態(tài)懸浮芯片技術(shù),特別是Luminex液相懸浮芯片技術(shù),是一種利用多重懸浮微球編碼技術(shù)進行高通量、多重檢測的平臺。其原理主要基于以下幾個方面:
一、多重編碼微球
核心要素:液態(tài)懸浮芯片技術(shù)的核心是多重編碼微球。這些微球通常由聚苯乙烯等材料制成,直徑在微米級別(如5.6um)。
編碼方式:每個微球上都帶有特定的熒光染料組合編碼,這些熒光染料的不同配比可以產(chǎn)生多種具有光譜特征的微球。通過調(diào)節(jié)兩種或多種熒光染料的不同配比,可以獲得多達上百種不同的微球編碼。
功能應用:這些編碼使得研究人員可以在同一反應體系中區(qū)分不同的微球,從而實現(xiàn)對多種分析物的并行檢測。
二、抗體偶聯(lián)
偶聯(lián)過程:在微球表面,通過化學方法偶聯(lián)上特定的抗體。這些抗體能夠高特異性地結(jié)合樣本中的目標分子,如蛋白質(zhì)、核酸、細胞因子等。
捕獲目標:當樣本與編碼微球混合并孵育后,目標分析物會與微球表面的抗體發(fā)生特異性結(jié)合,從而被捕獲在微球上。
三、檢測過程
標記與檢測:孵育后的微球通過二次抗體和熒光標記鏈霉親和素進行標記。隨后,使用流式細胞儀等儀器進行檢測。流式細胞儀能夠讀取每個微球的編碼和熒光信號,從而定量分析每種分析物的濃度。
信號放大:在檢測過程中,通常會通過加入生物素標記的高親和配對檢測抗體和SA-PE偶聯(lián)物來形成“三明治"結(jié)構(gòu),并通過另一束激光照射進行信號放大檢測,以提高檢測的靈敏度和準確性。
四、技術(shù)特點
高通量:液態(tài)懸浮芯片技術(shù)可以在單個實驗中同時分析多種分析物,大大提高了檢測效率。
高靈敏度:由于采用了熒光編碼和流式細胞儀檢測,該技術(shù)具有很高的靈敏度,能夠檢測到極低濃度的目標分子。
重復性好:每個指標有大量的反應單元,可以通過多次分析取平均值來提高結(jié)果的重復性。
靈活性:不同的磁珠/微球可以自由組合,以適應不同的檢測需求。
五、應用領域
液態(tài)懸浮芯片技術(shù)廣泛應用于生物學、基礎醫(yī)學、免疫學、核酸研究、酶學分析等多個領域。例如,在腫瘤標志物的聯(lián)合檢測、病毒抗體的快速篩查、細胞因子和生長因子的定量分析等方面都展現(xiàn)出了巨大的應用潛力。
綜上所述,液態(tài)懸浮芯片技術(shù)通過多重編碼微球、抗體偶聯(lián)、檢測過程以及技術(shù)特點等多個方面的綜合作用,實現(xiàn)了對多種分析物的高通量、高靈敏度、高重復性的并行檢測。
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